1.具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s2步驟對酶的活性進(jìn)行檢測中，tmb+znfenps+h2o2在波長為650nm的時候吸光度約為1.7(652nm)，而tmb+znfenps、tmb+h2o2以及單tmb單基底時，隨著波長的增加，吸光度變化較小，且吸光度較添加znfenps后的基底，吸光度小很多，ta+znfenps+h2o2在波長為430nm左右時，熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，說明酶活最高，相較于ta+znfenps、ta+h2o2以及單ta作為基底時，ta+znfenps+h2o2中的酶活要高很多，該pod酶隨著濃度的升高以及反應(yīng)時間的增加吸光度也會增加，當(dāng)溫度在50至60℃時，該pod酶吸光度最高，在微酸性環(huán)境中，pod酶性活躍，該pod酶活在tmb濃度為0至1mm之間的時候，酶活快速的增長，在之后呈緩慢的增長，并且增長速度逐漸減小，該pod酶活在h2o2濃度為0至1mm之間的時候，酶活快速的增長，在之后呈緩慢的增長，并且增長速度逐漸減小。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，細(xì)菌培養(yǎng)采用糞腸球菌enterococcusfaecalis測試znfenps的抗菌性能，采用腦心浸液肉湯培養(yǎng)基(bhi)培養(yǎng)基作為糞腸球菌的液體和固體培養(yǎng)基，將糞腸球菌復(fù)蘇液與凍干菌粉混勻，吸取100μl混合液均勻涂于bhi固體培養(yǎng)基上，在37℃，5％h2o2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，得到糞腸球菌第一代菌菌苔；從第一代菌種中挑取菌落，轉(zhuǎn)移至10ml的bhi液體培養(yǎng)基中，在37℃，5％co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)8-12h，采用麥?zhǔn)媳葷醿x將得到的細(xì)菌懸液稀釋至菌濃度為106cfu/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，znfenps對游離菌的抗菌作用采用平板計數(shù)法對znfenps對游離e.faecalis(糞球腸菌)的抑菌效果進(jìn)行評估，首先，znfenps溶于雙蒸水中配成不同濃度，加入取400μl的e.faecalis懸液，使各組終濃度為0、2、10、150、20、25、30μg/ml，共孵育60min，0μg/ml的znfenps組作為對照組，接下來，各組取20μl混懸液，將其涂在bhi瓊脂板上，在37℃，5％co2培養(yǎng)箱孵育24小時，最后，對每組細(xì)菌菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)，每組實驗重復(fù)3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，znfenps對菌斑生物膜的破壞作用，將3ml的108cfu/ml的糞腸球菌菌懸液加入12孔板中，于37℃，5％co2細(xì)菌培養(yǎng)箱靜置96h，2天后更換培養(yǎng)基，獲得糞腸球菌生物膜，隨后小心地移除bhi培養(yǎng)基，使用pbs輕柔沖洗去除浮游細(xì)菌，接著各組加入pbs、h2o2、znfenps、znfenps+h2o2溶液于細(xì)菌培養(yǎng)箱中共孵育60min；共培養(yǎng)結(jié)束后，吸出每組材料溶液，并用結(jié)晶紫染色法測定生物膜的量，每孔加入2ml的0.1％結(jié)晶紫草酸銨染色液，常溫下靜置30min后吸出，每組加入2ml的pbs輕柔沖洗1次，觀察生物膜染色情況，然后加入2ml無水乙醇溶解染料，最后加入96孔板檢測590nm處吸光度值，為了評價抗菌膜的效果，進(jìn)行了細(xì)菌活/死熒光染色實驗，將1.5ml的108cfu/ml的糞腸球菌菌懸液加入到激光共聚焦專用培養(yǎng)皿中，于37℃，5％co2細(xì)菌培養(yǎng)箱靜置96h，獲得糞腸球菌生物膜；輕柔吸出舊培養(yǎng)基，pbs輕柔沖洗2次，接著各組加入pbs、h2o2、znfenps、znfenps+h2o2溶液于細(xì)菌培養(yǎng)箱中共孵育60min；共培養(yǎng)結(jié)束后，吸出每組材料溶液，pbs輕柔洗滌2次，在每個孔中應(yīng)用live/death細(xì)菌活力試劑盒常溫避光下染色15分鐘，隨后各孔用pbs沖洗，使用倒置雙光子激光共聚焦掃描顯微鏡觀察染色后的生物膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，細(xì)菌胞內(nèi)ros水平采用了胞內(nèi)ros探針dcfh-da，每組取原菌液0.5ml，經(jīng)3000r，5min離心獲得沉淀，pbs洗滌2次，再次離心獲得沉淀，每組(除陰性對照)加入1μl的dcfh-da探針+999μl工作液，避光條件下，37℃水浴鍋孵育45min，每3-5min顛倒搖勻1次，離心獲得沉淀，用pbs洗滌3次(3000r，5min)，去掉未進(jìn)入細(xì)胞的探針；各組依次加入pbs、h2o2、znfenps、znfenps+h2o2、陽性刺激和陰性對照試劑；于37℃水浴鍋培養(yǎng)60min，培養(yǎng)結(jié)束后離心，收集沉淀，用pbs洗滌1次，再用試劑3工作液重懸，混勻，每組取100μl加入到避光96孔板中，激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長525nm下檢測熒光強(qiáng)度。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，細(xì)菌胞內(nèi)gsh含量采用了谷胱甘肽含量試劑盒：按照谷胱甘肽檢測試劑盒說明書配制一系列谷胱甘肽工作液，每組取原菌液0.5ml，經(jīng)3000r，5min離心獲得沉淀，pbs洗滌1次，再次離心獲得沉淀，各組依次加入pbs、h2o2、znfenps、znfenps+h2o2，于37℃水浴鍋培養(yǎng)60min，然后離心，收集沉淀，按照說明書加入蛋白去除試劑，37水浴/冰浴快速凍融兩次，4℃冰箱孵育5min，10000g離心收集沉淀，加入總谷胱甘肽檢測工作液，室溫孵育，最后各組取200μl加入96孔板檢測412nm處吸光度值。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s3步驟中對znfenps進(jìn)行抗菌性能測試中，細(xì)菌tem形貌觀察：每組取原菌液0.5ml，3000r，5min離心獲得沉淀，pbs洗滌一次，再次離心獲得沉淀，各組依次加入pbs、h2o2、znfenps、znfenps+h2o2，于37℃水浴鍋培養(yǎng)60min，培養(yǎng)結(jié)束后離心，收集沉淀，用pbs洗滌1次，加入2.5％的戊二醛溶液固定24h；通過tem觀察各組處理后糞腸球菌的形態(tài)變化。
9.根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶的制備方法，其特征在于：所述s7步驟中最后通過sem觀察根冠1/3、根中1/3、根尖1/3的根管壁細(xì)菌黏附情況，使用了caron等人的評分標(biāo)準(zhǔn)，對其進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)描述。
10.根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1至9任意一項所述的具有增強(qiáng)過氧化物酶活的雙金屬納米酶在牙齒根管治療中的應(yīng)用。