用于抗細(xì)胞內(nèi)病原體的治療的包含固體納米顆粒和至少一種抗原的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物組合物，其可用于預(yù)防性治療由細(xì)胞內(nèi)病原體等所導(dǎo)致的感染，所述病原體例如，病毒、細(xì)菌或寄生蟲，且更具體是剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)。
【背景技術(shù)】
[0002]剛地弓形蟲(縮寫為T.gondii)是弓形蟲屬中的一類寄生蟲原蟲。剛地弓形蟲的終宿主(definitive host)是貓類，但是許多溫血動物(鳥類、牛類、羊類還有人)可攜帶該寄生蟲。剛地弓形蟲的生命周期有兩個階段。生命周期的有性部分(球蟲等)僅發(fā)生在貓類(無論是家貓還是野貓)中，這使得貓類成為該寄生蟲的首要宿主(primary host)。第二階段(生命周期的無性部分)可發(fā)生在其它溫血動物中，該動物被稱為中間宿主。
[0003]剛地弓形蟲存在三種形式:
[0004]-速殖子，其始終在細(xì)胞內(nèi)且在中間宿主的細(xì)胞中復(fù)制，所述速殖子形式不是污染物且當(dāng)其在細(xì)胞外時可輕松地被破壞；
[0005]-緩殖子，其包含在囊腫中(主要是在中間宿主的免疫應(yīng)答較低的肌肉和腦組織中)；這種形式是經(jīng)口污染物；
[0006]-子孢子，其包含在孢子形成的囊合子中，其為能夠在中間宿主和終宿主外存活的形式；這種形式也是經(jīng)口污染物。
[0007]弓形體病(剛地弓形蟲是該疾病的致病因子)通常不嚴(yán)重且具自限性，但是卻可能對胎兒(其母體在懷孕期間首次感染了該疾病)或者對免疫缺陷患者具有嚴(yán)重或甚至致命的影響。例如，在牛類和羊類中，弓形體病是流產(chǎn)的主要原因，因此會產(chǎn)生巨大的損失。
[0008]近來，已經(jīng)有了這樣的假定，認(rèn)為弓形蟲與精神分裂癥具有一定程度的因果關(guān)系。這個假設(shè)依賴于弓形蟲抗體的患病率以及精神分裂癥發(fā)展之間的正相關(guān)。這項研宄提供了在情緒和精神病癥模型中弓形蟲的累計行為影響值的一個實例(Yolken RH, Bachmann S，Rouslanova I，Lillehoj E，F(xiàn)ord G，F(xiàn)uller Torrey et al.Antibodies to Toxoplasmagondii in individuals with first-episode schizophrenia.Clin.1nfect.Dis.2001 ；32:842-44.)。
[0009]因此，本發(fā)明的一個目的是提供藥物組合物，其能夠提供疫苗為患者抵抗細(xì)胞內(nèi)病原體，更具體是抵抗細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(例如，原蟲)，更具體地是，剛地弓形蟲。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含作為活性成分的以下混合物:
[0011]-固體納米顆粒，其包含多孔陽離子-多糖核心，該核心裝載有至少一種陰離子磷脂并且在所述核心周圍沒有任何的磷脂層；
[0012]-從所述病原體(pathogenicagent)獲得的至少一種抗原；和
[0013]-藥學(xué)上可接受的溶劑。
[0014]更具體地，本發(fā)明涉及前述藥物組合物，其用于在患者中抗細(xì)胞內(nèi)病原體的預(yù)防性治療或預(yù)防性治療由細(xì)胞內(nèi)病原體導(dǎo)致的疾病或感染。
[0015]根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“治療”是指在疾病、病癥或障礙的治療或改善或預(yù)防中任何成功的標(biāo)志，包括任何客觀的或主觀的參數(shù)，例如減緩、緩和、減輕癥狀或使患者對該疾病病癥更加耐受，減緩惡化或衰退速度或者使得惡化的終點不那么使人虛弱。治療或改善癥狀可基于客觀的或主觀的參數(shù)，包括醫(yī)生的檢查結(jié)果。
[0016]術(shù)語“治療”還指患者體內(nèi)的病原體數(shù)量的任何減少或是病原體的任何改變，即使是短暫的時間。當(dāng)病原體具有多種形式(包括細(xì)胞外形式)，病原體的至少一種形式的減少或改變均被認(rèn)為是治療效果。如果該病原體可能存在于患者體內(nèi)的多個器官中，在至少一個器官中病原體數(shù)量的減少或病原體的改變均被認(rèn)為是治療效果。
[0017]因此，術(shù)語“治療”包括給藥本發(fā)明組合物以預(yù)防或推遲、減輕、或阻止或抑制與本文所述的疾病、病癥或障礙有關(guān)的癥狀或病癥的發(fā)展。術(shù)語“治療性的”是指在受試者中至少部分減少、消除或預(yù)防該疾病、該疾病的癥狀或該疾病的副作用。
[0018]術(shù)語“預(yù)防性的”是指該治療能夠預(yù)防或推遲疾病的發(fā)作，或能夠預(yù)防其臨床表現(xiàn)或亞臨床癥狀。
[0019]術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適于與人和動物的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或其他問題并發(fā)癥的具有合理的益處/風(fēng)險比的那些溶劑、化合物、原料、組合物或劑型。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明涉及用作藥物，尤其是用作使患者產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答的免疫原性藥物的前述組合物。但是，本發(fā)明不限于Thl免疫應(yīng)答(細(xì)胞應(yīng)答)。所述藥物組合物還可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體(體液應(yīng)答)或誘導(dǎo)這兩種應(yīng)答。在本發(fā)明中，“免疫應(yīng)答”是指由免疫系統(tǒng)、細(xì)胞免疫應(yīng)答和/或體液免疫應(yīng)答引起的任何反應(yīng)。這些反應(yīng)包括生物體免疫系統(tǒng)響應(yīng)抗原的活性的改變并且可包括，例如，抗體的產(chǎn)生、細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的誘導(dǎo)、補體的激活或免疫耐受的發(fā)展。所述免疫應(yīng)答可以是Thl應(yīng)答或Th2應(yīng)答或其混合。術(shù)語“免疫原性”是指直接或間接地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
[0021]根據(jù)本發(fā)明，所述納米顆粒核心裝載有至少一種磷脂。因此，該固體核心是多孔的且其孔填充有磷脂或至少兩種脂或磷脂的混合物。該納米顆粒核心由陽離子多糖或至少兩種陽離子-多糖的混合物構(gòu)成。它還可由與所述陽離子多糖共聚或不與所述陽離子多糖共聚的任何其他化合物構(gòu)成。
[0022]根據(jù)本發(fā)明，所述納米顆粒核心未被任何磷脂層包圍。磷脂層被定義為包含至少一種磷脂的層。
[0023]所述陽離子多糖可以是交聯(lián)聚合物且可通過多糖與陽離子配體(例如季銨鹽)之間的反應(yīng)獲得，所述多糖選自淀粉、葡聚糖、糊精和麥芽糖糊精。還可用伯胺、仲胺和叔胺。更具體地，所述陽離子多糖可由麥芽糖糊精和縮水甘油基三甲銨之間的反應(yīng)獲得。
[0024]所述陰離子磷脂可選自甘油磷脂且可以是，例如，二?；字８视?，例如二酰基磷脂酰絲氨酸、二?；字＜〈己投貦磅；字８视?。
[0025]以下實驗結(jié)果表明，至少就剛地弓形蟲而言，本發(fā)明組合物誘導(dǎo)產(chǎn)生抵抗剛地弓形蟲的特異性IFN-γ。就弓形蟲病而言，已知的是，宿主抗性似乎是通過NK細(xì)胞和自適應(yīng)T淋巴細(xì)胞合成IFN-Y而引發(fā)的。感染后，抗原呈遞細(xì)胞合成TNF-α和IL-12，其誘導(dǎo)NK細(xì)胞分泌IFN-γ。IL-12和IFN-γ的聯(lián)合作用誘導(dǎo)T輔助性前體(helper precursor)急劇分化成Thl淋巴細(xì)胞。然后這些⑶4+T細(xì)胞合成大量的IFN-γ和IL-2。最終這兩種細(xì)胞因子誘導(dǎo)⑶8+Τ淋巴細(xì)胞的增殖和IFN-γ的分泌。因此，對剛地弓形蟲感染的預(yù)防主要取決于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。因此，當(dāng)母體已經(jīng)用本發(fā)明組合物/疫苗治療時，本發(fā)明組合物還能保護其胎兒。
[0026]根據(jù)本發(fā)明，所述細(xì)胞內(nèi)病原體為細(xì)胞內(nèi)病原體，其可以是病毒、細(xì)菌、分枝桿菌、真菌或寄生蟲。將細(xì)胞內(nèi)病原體定義為具有至少一種細(xì)胞內(nèi)形式的任意微生物或大型生物。術(shù)語“致病的”是指能夠引起患者或患者的子代(progeny)或后代(offspring)的生理和/或心理上的變化的因素。
[0027]可引用以下作為細(xì)胞內(nèi)病原體的實例:單純皰瘆病毒I和2、人乳頭狀瘤病毒、愛潑斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、巨細(xì)胞病毒、結(jié)核分枝桿菌、登革熱病毒、HIV,人呼吸道合胞體病毒(RSV)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。
[0028]根據(jù)本發(fā)明，“寄生蟲”是指從消耗所謂“宿主”的其他生物體中獲益的任何微生物或大型生物。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語寄生蟲包括大型寄生蟲(代表性地有蠕蟲)和微型寄生蟲(代表性地有原蟲)，以及在它們生命周期過程中可能存在的所有形式。
[0029]當(dāng)所述病原體為在其生命周期過程中具有細(xì)胞內(nèi)形式的寄生蟲時，則其可選自:頂復(fù)門細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(apicomplexan intracellular para