1.一種對(duì)甲硫醇鈉耐受性提高的o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體,其特征在于,所述突變體是將seq?id?no.1所示的o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列的第59位、第119位進(jìn)行單突變或多突變獲得的。
2.如權(quán)利要求1所述的突變體,其特征在于,所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體是將seq?id?no.1所示氨基酸序列突變?yōu)橄铝兄唬?1)第59位的蘇氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?2)第119位的蘇氨酸突變?yōu)槔野彼幔?3)第59位的蘇氨酸突變?yōu)楫惲涟彼嵋约暗?19位的蘇氨酸突變?yōu)槔野彼帷?/p>
3.一種含權(quán)利要求1所述突變體的編碼基因的重組基因工程菌。
4.一種權(quán)利要求1所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體在催化甲硫醇鈉生產(chǎn)l-甲硫氨酸中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用,其特征在于,所述的應(yīng)用為:以含所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體編碼基因的工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體或濕菌體超聲破碎提取的純酶液為催化劑,以o-琥珀酰-l-高絲氨酸和甲硫醇鈉為底物,以ph7-9的緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系,在30℃,800rpm的恒溫震蕩金屬浴中反應(yīng),反應(yīng)液分離純化,獲得l-甲硫氨酸。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述反應(yīng)體系中,濕菌體加入量為5-15g/l;純酶液加入量以蛋白濃度計(jì)為50-150mg/l;o-琥珀酰-l-高絲氨酸加入濃度20-80g/l;甲硫醇鈉體積加入濃度1-15%。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述反應(yīng)體系中還含有5′-磷酸吡哆醛,加入終濃度為10-50mm。
8.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述緩沖液為2m,ph?8.0的tris-hcl緩沖液。
9.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述催化劑按如下方法制備: