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O-琥珀酰-L-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體及其應(yīng)用

文檔序號(hào):39561505發(fā)布日期:2024-09-30 13:35閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種對(duì)甲硫醇鈉耐受性提高的o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體,其特征在于,所述突變體是將seq?id?no.1所示的o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列的第59位、第119位進(jìn)行單突變或多突變獲得的。

2.如權(quán)利要求1所述的突變體,其特征在于,所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體是將seq?id?no.1所示氨基酸序列突變?yōu)橄铝兄唬?1)第59位的蘇氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?2)第119位的蘇氨酸突變?yōu)槔野彼幔?3)第59位的蘇氨酸突變?yōu)楫惲涟彼嵋约暗?19位的蘇氨酸突變?yōu)槔野彼帷?/p>

3.一種含權(quán)利要求1所述突變體的編碼基因的重組基因工程菌。

4.一種權(quán)利要求1所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體在催化甲硫醇鈉生產(chǎn)l-甲硫氨酸中的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用,其特征在于,所述的應(yīng)用為:以含所述o-琥珀酰-l-高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體編碼基因的工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體或濕菌體超聲破碎提取的純酶液為催化劑,以o-琥珀酰-l-高絲氨酸和甲硫醇鈉為底物,以ph7-9的緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系,在30℃,800rpm的恒溫震蕩金屬浴中反應(yīng),反應(yīng)液分離純化,獲得l-甲硫氨酸。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述反應(yīng)體系中,濕菌體加入量為5-15g/l;純酶液加入量以蛋白濃度計(jì)為50-150mg/l;o-琥珀酰-l-高絲氨酸加入濃度20-80g/l;甲硫醇鈉體積加入濃度1-15%。

7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述反應(yīng)體系中還含有5′-磷酸吡哆醛,加入終濃度為10-50mm。

8.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述緩沖液為2m,ph?8.0的tris-hcl緩沖液。

9.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,所述催化劑按如下方法制備:


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種O?琥珀酰?L?高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶突變體及其應(yīng)用,所述突變體是將SEQ?ID?NO.1所示的O?琥珀酰?L?高絲氨酸巰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列的第59位、第119位進(jìn)行單突變或多突變獲得的。本發(fā)明通過(guò)半理性設(shè)計(jì),定點(diǎn)突變技術(shù)改造MetZ,最終獲得了在不損失酶活力的情況下對(duì)高濃度甲硫醇鈉環(huán)境下耐受性提高的突變體。本發(fā)明的突變體對(duì)甲硫醇鈉的耐受性大幅提高,由突變前的5%提高到15%,具有很大工業(yè)價(jià)值。本發(fā)明突變體對(duì)底物的轉(zhuǎn)化率顯著提高,有利于生產(chǎn)應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員:湯曉玲,趙康,柳志強(qiáng),鄭裕國(guó)
受保護(hù)的技術(shù)使用者:浙江工業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/9/29
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