] b、使用Xevo TQ串聯(lián)四極桿液相質譜儀來檢測蜀黍苷標準溶液，液相條件：流動 相A :0. 1%甲酸-水；流動相B :乙腈。流速0. 3 mL/min ;洗脫梯度：流動相B 4min由5%線 性增加至40%，再Imin由40%線性增加至100%，持續(xù)lmin，再Imin由100%線性減少至5% ; 色譜柱：Waters Acquity C18 column，50mmX2. ImmX 1.7 μπι;進樣量 2 μ L。ESI 離子源； 正離子模式；毛細管電壓2.7 kV，錐孔電壓20 V，碰撞能量12 V ;源溫度120°C，去溶劑溫度 300°C;去溶劑氣體流速700 L/h，錐孔氣體流速50 L/h，碰撞氣體流速0.15 mL/min。檢測 結果如圖1和圖2所示。
[0017] c、根據圖1和圖2,蜀黍苷母離子為餘々329,特征子離子為餘々180及餘々 132,建立LC-MS/MS-MRM方法，選擇餘々329-180及餘々329-132作為定性離子對，餘々 329-132作為定量離子對。
[0018] (2)LC - MS/MS - MRM方法對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷定性檢測：取5g磨碎之 后的高粱于燒杯中，加入20mL甲醇，超聲萃取30min后過夜保存，次日取萃取液置于50mL 離心管12000rpm離心30min取上清濾液后加入體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除 20mL甲醇后取ImL待進樣檢測，定性檢測結果如圖3所示。
[0019] (3)制作蜀黍苷定量標準曲線對不同酒廠釀酒原料高粱中蜀黍苷進行定量： d、標準曲線制作：將20mg/L蜀黍苷標準使用液梯度稀釋成一系列蜀黍苷標準使用液， 以峰面積為橫坐標，濃度為縱坐標繪制標準曲線，標準曲線如圖4所示。
[0020] e、供試樣品的準備：采集瀘州老窖、沱牌舍得、汾酒、扳倒井、古井貢、雙輪和衡水 老白干7個酒廠高粱樣品。
[0021] f、不同白酒廠釀酒原料高粱預處理：分別取5 g磨碎后的高粱于燒杯中，加入 20mL甲醇，超聲波萃取30min后過夜，次日將萃取液置于50mL離心管12000 rpm離心 30min取上清過濾后加入體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除20mL甲醇后取ImL待 進樣。
[0022] g、白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的定量分析：使用LC - MS/MS - MRM方法檢測樣品， 使用標準曲線進行定量，檢測結果如表1所示。
[0023] 表1不同酒廠釀酒原料高粱中蜀黍苷的含量
(4)定量白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷方法的評價： 通過上述標準曲線分析圖表可知，該方法對于定量蜀黍苷有很寬的線性范圍，而且在 線性范圍內線性關系很好（R2X). 99)，可見該方法的適用范圍比較廣。
[0024] 在釀酒原料高粱樣品中添加相似濃度的蜀黍苷標準品，計算蜀黍苷定量方法的回 收率，并通過重復性實驗的相對標準偏差來考察該定量方法的精確性，具體如表2所示。
[0025] 表2蜀黍苷定量方法的回收率和精確性（n=3)
該方法定量蜀黍苷的下限低于樣品中蜀黍苷的含量，可以采用此方法對釀酒原料高粱 中的蜀黍苷進行定量，且該方法表現(xiàn)出很好的準確性(相對標準偏差在I. 17%~2. 26%之間） 和精確性（回收率在93%~97%之間)，完全能夠滿足釀酒原料高粱中蜀黍苷的定量檢測。
【主權項】
1. 一種快速檢測白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的方法，其特征在于步驟為： (1)通過Xevo TQ串聯(lián)四極桿液相質譜儀檢測蜀黍苷標準品來確定其特征離子并建立 LC - MS/MS - MRM ： a、 用甲醇配制200mg/L的蜀黍苷標準品儲備液作為最高濃度，用甲醇將其稀釋至 20mg/L作為蜀黍苷標準使用液；取ImL蜀黍苷標準使用液用微孔濾膜過濾處理后放入2mL 樣品瓶待進樣檢測； b、 使用Xevo TQ串聯(lián)四極桿液相質譜儀來檢測蜀黍苷標準溶液，液相條件：流動相A : 0. 1%甲酸-水；流動相B :乙腈；流速0. 3mL/min ;洗脫梯度：流動相B 4min由5%線性增加 至40%，再Imin由40%線性增加至100%，持續(xù)lmin，再Imin由100%線性減少至5% ;色譜 柱：Waters Acquity C18 column，50mmX 2. ImmX 1.7 ym ;進樣量2 y L ;ESI 離子源；正離子 模式；毛細管電壓2. 7kV，錐孔電壓20V，碰撞能量12V ;源溫度120°C，去溶劑溫度300°C;去 溶劑氣體流速700L/h，錐孔氣體流速50L/h，碰撞氣體流速0. 15mL/min ; c、 根據檢測結果，蜀黍苷母離子為餘々 329,特征子離子為餘々180及餘々132,建立 LC - MS/MS-MRM方法，選擇餘々329-180及餘々329-132作為定性離子對，餘々329-132作 為定量尚子對； (2) LC - MS/MS - MRM方法對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷定性檢測：取5g磨碎之后的 高粱放置于燒杯中，加入20mL甲醇，超聲波萃取30min后過夜保存，次日取萃取液置于50mL 離心管12000rpm離心30min取上清濾液，加入體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除 20mL甲醇后取ImL待進樣檢測； (3) 制作蜀黍苷定量標準曲線對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷進行準確定量： d、 標準曲線制作：將20mg/L蜀黍苷標準使用液梯度稀釋成一系列蜀黍苷標準使用液， 以峰面積為橫坐標，濃度為縱坐標繪制標準曲線； e、 白酒釀酒原料高粱預處理：取5g磨碎后的高粱于燒杯中，加入20mL甲醇，超聲波萃 取30min后過夜，次日將萃取液置于50mL離心管12000rpm離心30min，取上清濾液后加入 體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除20mL甲醇后取ImL待進樣； f、 白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的定量分析：使用LC - MS/MS - MRM方法檢測樣品，使用 標準曲線進行定量。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速檢測白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的方法，屬于白酒分析檢測技術領域。本發(fā)明通過液相質譜法檢測蜀黍苷標準品確定特征離子并建立多重反應監(jiān)測（LC–MS/MS–MRM）方法、使用LC–MS/MS–MRM方法對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷定性檢測，制作蜀黍苷定量標準曲線對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷進行準確定量等步驟實現(xiàn)。本發(fā)明使用0.1%甲酸-水及乙腈作為流動相對樣品中的蜀黍苷進行梯度洗脫分離后串聯(lián)質譜檢測，再通過標準曲線進行準確定量。本發(fā)明操作簡單，檢測靈敏且自動化程度高，特異性高；可進一步利用本方法對不同種類釀酒高粱中的蜀黍苷進行檢測，從而對白酒安全進行更好的控制。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105092756
【申請?zhí)枴緾N201510308706
【發(fā)明人】范文來, 徐巖, 張順榮
【申請人】江南大學
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年6月9日