一種愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測(cè)方 法，并由此得到其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
【背景技術(shù)】
[0002] 愈傷靈膠囊由土鱉蟲、紅花、自然銅(煅)、黃瓜子(炒)、冰片、續(xù)斷、三七、當(dāng)歸、落 新婦提取物九味藥材組成。該方具有活血散瘀，消腫止痛之功效，主要用于治療跌打挫傷、 筋骨瘀血腫痛。愈傷靈處方來源于《部頒標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第八冊(cè)。
[0003] 愈傷靈膠囊作為中成藥，其藥效是多種活性成分共同作用的結(jié)果。但目前愈傷 靈膠囊的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有鑒別項(xiàng)，無含量測(cè)定項(xiàng)，無法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行有效監(jiān)控。針對(duì) 愈傷靈膠囊的質(zhì)量檢測(cè)方法的公開專利只有一個(gè)，中國專利200710176059.6 (公開號(hào) CN101153864A)，僅采用HPLC法控制其巖白菜素的含量。針對(duì)愈傷靈膠囊的質(zhì)量檢測(cè)方法 如下，《中國醫(yī)藥》2012年5月第7卷增刊《高效液相色譜法測(cè)定愈傷靈膠囊中三七皂苷R1、 人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl含量》、《中成藥》2006年2月第28卷第2期《愈傷靈膠囊質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)研究》、《醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》2006年10月第25卷第10期《愈傷靈膠囊的質(zhì)量控制》等文章 中記載了一種測(cè)定愈傷靈膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rgl或人參皂苷Rbl的含量的HPLC 方法；《安徽醫(yī)藥》2009年《HPLC法測(cè)定愈傷靈膠囊中巖白菜素的含量》記載了一種測(cè)定愈 傷靈膠囊中巖白菜素含量的HPLC方法；《中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第七次中藥分析學(xué)術(shù)交流會(huì)論文 集》收錄的《愈傷靈膠囊的特征圖譜研究及多指標(biāo)成分的含量測(cè)定》中記載了一種愈傷靈膠 囊的特征圖譜及多指標(biāo)成分測(cè)定方法?，F(xiàn)有技術(shù)中，僅有一篇文獻(xiàn)報(bào)道了愈傷靈膠囊的指 紋圖譜方法，其監(jiān)控了紅花、三七、當(dāng)歸、續(xù)斷、落新婦五味藥材，本方法則監(jiān)控了土鱉蟲、紅 花、三七、當(dāng)歸、續(xù)斷、落新婦六味藥材，較其多監(jiān)控了一味藥材(土鱉蟲)，且土鱉蟲具有破 血逐瘀、續(xù)筋接骨之功效，主要用于跌打損傷、筋傷骨折、血瘀經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀阻腹痛、癮瘕痞 塊等癥的治療，是愈傷靈膠囊發(fā)揮其功效的關(guān)鍵藥材，故控制其質(zhì)量有較大意義。此外，文 獻(xiàn)中采用的方法為UPLC法，本專利方法為HPLC法，后者適用范圍更廣，更有利于企業(yè)對(duì)愈 傷靈膠囊的質(zhì)量進(jìn)行全面控制并節(jié)約企業(yè)的檢測(cè)成本。因此，建立愈傷靈膠囊的指紋圖譜 檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜具有非常重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對(duì)愈傷靈膠囊的質(zhì)量控制現(xiàn)狀，提供一種基于高效液相色譜法 的愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測(cè)方法及根據(jù)該方法建立得到的愈傷靈膠囊的高效液相色譜 指紋圖譜，有利于對(duì)其原料藥材、中間體及其終產(chǎn)品質(zhì)量的有效控制以保證其臨床療效。
[0005] 本發(fā)明的愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測(cè)方法，包括如下步驟： (1)對(duì)照品洛液的制備： 稱取人參皂苷Rgl對(duì)照品，置于20~50ml容量瓶中，加50%~100%甲醇溶解并定容至刻 度，搖勻，制成對(duì)照品溶液； (2) 供試品溶液的制備： 取愈傷靈膠囊內(nèi)容物，加80%~100%甲醇50~100ml，稱重，回流提取2~4h，放冷，再稱定 重量，用同種溶劑補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； (3) 色譜條件： 色譜柱為C1S反相色譜柱；采用梯度洗脫，流動(dòng)相為流動(dòng)相A與流動(dòng)相B組成的梯度洗 脫液，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 1~0. 2%磷酸溶液；檢測(cè)波長初始為244nm，18min時(shí)切 換波長為 200nm ;柱溫 25°C ~30°C ;流速 0· 8ml/min~l. 2ml/min ;分析時(shí)間 65min ; (4) 測(cè)定： 精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得 到指紋圖譜。
[0006] 本發(fā)明中，所述的愈傷靈中藥方為現(xiàn)有中藥方，其包括土鱉蟲、紅花、自然銅(煅)、 黃瓜子(炒)、冰片、續(xù)斷、三七、當(dāng)歸、落新婦提取物九味藥材，各藥材的重量份數(shù)比一般為： 60:120:30:120:120:60:180:90:50. 4。上述愈傷靈膠囊可由下述方法制得：以上九味，除冰 片、落新婦提取物外，其余紅花等七味粉碎成細(xì)粉，按現(xiàn)有常規(guī)方法制成膠囊劑。
[0007] 本發(fā)明中，所述的供試品制備方法中，供試品的稱樣量為0. 5~2g，回流提取時(shí)間為 2~4h，優(yōu)選的提取時(shí)間為3h。
[0008] 本發(fā)明中，所述的流動(dòng)相B為0. 1~0. 2%磷酸溶液，優(yōu)選的為0. 1%磷酸溶液，洗脫 梯度如表1所示。
[0010] 本發(fā)明中，所述的檢測(cè)波長初始為244nm，18min時(shí)切換波長為200nm。
[0011] 本發(fā)明中，所述的總流速為0· 8~L 2ml/min，優(yōu)選的為1.0ml/min。
[0012] 本發(fā)明中，所述的柱溫為25°C ~35°C。
[0013] 本發(fā)明中，精密吸取注入高效液相色譜儀的供試品溶液的進(jìn)樣量為10 μ 1。
[0014] 本發(fā)明中，依據(jù)所得的10批愈傷靈膠囊的指紋圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中所 述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜具有15個(gè)共有峰，其中4號(hào)峰為綠原酸，5號(hào)峰為羥基紅花黃色素Α，7號(hào)峰 為人參皂苷Rgl，9號(hào)峰為人參皂苷Rbl，10號(hào)峰為藁本內(nèi)酯。
[0015] 本發(fā)明中，所述的愈傷靈膠囊指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，其相似 度為0. 891~1. 000,共有峰有15個(gè)，共有峰峰面積總和占總峰面積的90%以上，以7號(hào)峰人 參皂苷Rgl為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，各峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為：（1) 0· 118~0· 125、（2) 0· 241~0· 250、（3) 0· 257~0· 293、（4) 0· 345~0· 380、（5) 0· 431~0· 462、 (6)0. 481~0· 524、（S) 1· 000、（8) 1· 100~1· 214、（9) 1· 022~1· 150、（10) 1· 302~1· 508、（11) 1· 402~1· 589、（12)1· 501~1· 708、（13)1· 587~1· 724、（14)1· 714~1· 901、（15)2· 001~2· 189 ; 各峰的相對(duì)峰面積分別為：（1) 0· 231~0· 501、（2) 0· 168~0· 455、（3) 0· 722~1· 121、（4) 0· 042~0· 230、（5) 0· 260~0· 507、（6) 0· 093~0· 192、（S) 1· 000、（8) 0· 479~0· 711、（9) 0· 527~0· 580、（10)0· 255~0· 569、（11)1· 081~3· 705、（12)0· 625~2· 705、（13)0· 107~0· 557、 (14) 2· 719~7· 105、（15) 0· 481~0· 861。
[0016] 優(yōu)選的各峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為：（1)0. 121~0· 123、（2)0·245~0·248、（3) 0· 282~0· 290、（4) 0· 359~0· 369、（5) 0· 444~0· 458、（6) 0· 493~0· 504、（S) 1· 000、（8) 1· 118~1· 185、（9) 1· 098~1· 140、（10) 1· 382~1· 480、（11) 1· 496~1· 506、（12) 1· 602~1· 661、 (13) L 664~L 687、（ 14) L 825~L 868、（ 15) 2· 094~2· 107 ;優(yōu)選的各峰的相對(duì)峰面積 分別為：（1) 0. 243~0· 585、（2)0. 184~0· 268、（3) 0. 837~1· 032、（4)0. 102~0· 197、（5) 0· 321~0· 477、（6) 0· 128~0· 171、（S) 1· 000、（8) 0· 509~0· 647、（9) 0· 559~0· 578、（ 10) 0· 341~0· 500、（11)1· 274~2· 005、（12)0· 713~2· 121、（13)0· 217~0· 439、（14)2· 936~6· 003、 (15) 0· 519~0· 830。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是： (1) 本發(fā)明愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測(cè)方法中，制備供試品溶液的方法前較為簡單，特 征性成分能較為完整的保留下來，且供試品溶液穩(wěn)定性良好； (2) 該高效液相色譜方法的專屬性、重現(xiàn)性好，分析時(shí)間較短。所得指紋圖譜中各特征 成分分離效果較好； (3) 本發(fā)明所建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜有15個(gè)共有峰，其中9個(gè)峰明確歸屬于6味藥材，信 息量較大，且明確了 5個(gè)指標(biāo)成份，較完整的保留了供試液中的化學(xué)成分； (4) 本發(fā)明中指認(rèn)了 5個(gè)特征峰，經(jīng)比較采用保留時(shí)間適中，分離度較好，峰面積較大 的人參皂苷Rgl對(duì)照品作為參照峰；