(寧波新芝生物科技股份有限公司）；FAZ004B分析天平（上海佑科）；BT12f5D電子天平（賽多 利斯科學(xué)儀器(北京）有限公司）。
[0059] (2)色譜條件。
[0060] 色譜柱為Unitary C1S (5 μ m，4.6X 250mm)反相色譜柱；柱溫為35°C;檢測波長初 始為244nm，18min時切換波長為200nm ;流動相A為乙腈，流動相B為0. 1%磷酸溶液，總流 速為1.0ml/min ;分析時間65分鐘。
[0061] 表4梯度運行表。
[0062] (3)參照物溶液的制備。
[0063] 稱取人參皂苷Rgl對照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成每1ml含0. 4mg 的溶液，搖勻，即得對照品溶液。
[0064] ( 4 )供試品溶液的制備。
[0065] 取愈傷靈膠囊內(nèi)容物0. 5g，加甲醇50ml，稱重，回流提取3h，放冷，再稱定重量，用 同種溶劑補重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； 藥材溶液的制備方法：分別取各單味藥材，按處方制備成粉末，按愈傷靈膠囊供試品溶 液制備方法制備對應(yīng)的單味藥材溶液，共9味藥材溶液。
[0066]陰性藥材溶液的制備方法：分別取除其中某味藥材的其他藥材，按處方制備成粉 末，按愈傷靈膠囊供試品溶液制備方法制備對應(yīng)的陰性藥材溶液，共9味陰性藥材溶液。
[0067] (5)成品與各原料藥材的相關(guān)性及各共有峰的歸屬。
[0068] 精密吸取上述參照物溶液和供試品溶液各10 μ 1，分別注入高效液相色譜儀中，照 高效液相色譜法測定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的圖譜，制定各共有峰的歸屬。見表5。
[0069] 表5各共有峰圖譜歸屬。
[0070] 所述愈傷靈膠囊的指紋圖譜有15個共有峰，其中歸屬于紅花的共有峰為：峰5 ;歸 屬于三七的共有峰為：峰7、峰9 ;歸屬于當歸的共有峰為：峰10 ;歸屬于續(xù)斷的共有峰為： 峰2、峰6 ;歸屬于土鱉蟲的共有峰為：峰14 ;歸屬于落新婦提取物的共有峰為：峰3。
【主權(quán)項】
1. 愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測方法，其特征在于采用高效液相色譜法，具體包括如下 步驟： (a) 對照品溶液的制備：稱取人參皂苷Rgl對照品，置于20~50ml容量瓶中，加 50%~100%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成對照品溶液； (b) 供試品溶液的制備：取愈傷靈膠囊內(nèi)容物，加80%~100%甲醇50~100ml，稱重，回流 提取2~4h，放冷，再稱定重量，用同種溶劑補重，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試 品溶液； (c) 色譜條件：色譜柱為C18反相色譜柱；采用梯度洗脫，流動相為流動相A與流動相 B組成的梯度洗脫液，流動相A為乙腈，流動相B為0. 1~0. 2%磷酸溶液；檢測波長初始為 244nm，18min 時切換波長為 200nm ;柱溫 25°C ~30°C;流速 0. 8ml/min~l. 2ml/min ;分析時間 65min ； (d) 測定：精密吸取對照品溶液與供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法 測定，得到指紋圖譜。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的愈傷靈膠囊主要由下述重量份數(shù)的 原藥材制得：土鱉蟲60份、紅花120份、自然銅(煅）30份、黃瓜子(炒）120份、冰片12份、 續(xù)斷60份、三七180份、當歸90份、落新婦提取物50. 4份。3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述的愈傷靈膠囊為由下述方法制得的愈 傷靈膠囊：以上九味，除冰片、落新婦提取物外，其余紅花等七味粉碎成細粉，按現(xiàn)有常規(guī)方 法制成膠囊劑。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的愈傷靈膠囊供試品溶液制備中，稱取 內(nèi)容物0. 5~2g，回流提取2~4h。5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：流動相B為0. 1~0. 2%磷酸溶液，優(yōu)選的為 0. 1%磷酸溶液，洗脫梯度如表所示。6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：檢測波長初始為244nm，18min時切換波長 為 200nm。7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：總流速為0. 8~1. 2ml/min，優(yōu)選的為 1. 0ml/min〇8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：柱溫為25°C ~35°C。9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：精密吸取注入高效液相色譜儀的對照品溶 液與供試品溶液的進樣量為10 μ 1。10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：依據(jù)所得的10批愈傷靈膠囊的指紋圖譜， 制定標準指紋圖譜；其中所述標準指紋圖譜具有15個共有峰，其中4號峰為綠原酸，5號峰 為羥基紅花黃色素 A，7號峰為人參皂苷Rgl，9號峰為人參皂苷Rbl，10號峰為藁本內(nèi)酯。11. 如權(quán)利要求1或10所述的方法，其特征在于：愈傷靈膠囊指紋圖譜與制定的標 準指紋圖譜進行比對，其相似度為〇. 891~1. 000,共有峰有15個，共有峰峰面積總和占 總峰面積的90%以上，以7號峰人參皂苷Rgl為參照峰，計算相對保留時間和相對峰面 積，各峰的相對保留時間分別為：（1) 〇· 118~0· 125、（2) 0· 241~0· 250、（3) 0· 257~0· 293、 (4) 0· 345~0· 380、（5) 0· 431~0· 462、（6) 0· 481~0· 524、（S) 1. 000、（8) 1. 100~1· 214、（9) 1. 022~1· 150、（10)1· 302~1· 508、（11)1· 402~1· 589、（12)1· 501~1· 708、（13)1· 587~1· 724、 (14) 1·714~1·901、（15)2·001~2· 189 ;各峰的相對峰面積分別為：（1)0.231~0.501、（2) 0. 168-0. 455^(3)0. 722-1. 12U(4)0. 042-0. 230^(5)0. 260-0. 507^(6)0. 093-0. 192^ (S) 1. 000、（8) 0· 479~0· 711、（9) 0· 527~0· 580、（10) 0· 255~0· 569、（11) 1· 081~3· 705、（12) 0· 625~2· 705、（13) 0· 107~0· 557、（14) 2· 719~7· 105、（15) 0· 481~0· 861。12. 優(yōu)選的各峰的相對保留時間分別為：（1)0. 121~0. 123、（2) 0.245~0.248、（3) 0· 282~0· 290、（4) 0· 359~0· 369、（5) 0· 444~0· 458、（6) 0· 493~0· 504、（S) I. 000、（8) L 118~1· 185、（9) L 098~1· 140、（10) L 382~1· 480、（11) L 496~1· 506、（12)1· 602~1· 661、 (13) L 664~L 687、（ 14) L 825~L 868、（ 15) 2· 094~2· 107 ;優(yōu)選的各峰的相對峰面積 分別為：（1) 0. 243~0· 585、（2)0. 184~0· 268、（3) 0. 837~1· 032、（4)0. 102~0· 197、（5) 0· 321~0· 477、（6) 0· 128~0· 171、（S) 1· 000、（8) 0· 509~0· 647、（9) 0· 559~0· 578、（10) 0· 341~0· 500、（11)1· 274~2· 005、（12)0· 713~2· 121、（13)0· 217~0· 439、（14)2· 936~6· 003、 (15) 0· 519~0· 830。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種愈傷靈膠囊的指紋圖譜檢測方法：方法包括：（a）對照品溶液的制備；（b）供試品溶液的制備；（c）色譜條件：色譜柱為C18反相色譜柱；流動相為乙腈與0.1-0.2%磷酸溶液，采用梯度洗脫；檢測波長初始為244nm，18min切換為200nm；柱溫25-30℃；流速0.8-1.2ml/min；分析時間65min。（d）測定：高效液相色譜法得指紋圖譜。本發(fā)明方法操作簡便，特征性成分保留完整，重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，專屬性強。所得指紋圖譜中各特征峰分離效果較好，可較全面的檢測愈傷靈膠囊中的多種主要有效成分；可用于控制愈傷靈膠囊的質(zhì)量，能更加完整、準確的評價愈傷靈膠囊的有效性、安全性、穩(wěn)定性和質(zhì)量均一性。本發(fā)明還公開了根據(jù)上述指紋圖譜檢測方法得到的愈傷靈膠囊的標準指紋圖譜。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105353050
【申請?zhí)枴緾N201510809727
【發(fā)明人】劉令安, 楊華, 郭元滿, 譚澤云, 易小蘭, 謝金華
【申請人】湖南漢森制藥股份有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月23日