10_15min 搖勾一次；
[0045] ②加入450 μ L乙酸鈉冰浴15min，在設定的離心參數(shù)為13000 Xg的條件下離心 8min ；
[0046] ③取上清至一新離心管，加入_20°C預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后在設定的離心 參數(shù)為13500 Xg的條件下離心10min，棄上清液；
[0047] ④取沉淀用75%的乙醇洗滌2次，室溫揮發(fā)乙醇，用TE buffer或無菌水溶解DNA， 再用適量的RNase A消化（37°C水浴l_2h)，取出后于-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0048] (2) CTAB 常規(guī)法
[0049] 步驟如下：
[0050] ①加入 ImL 65 °C 預熱的 CTAB 提取緩沖液（IOOmmol · T1Tris-HCl pH 8. 0、 20mmol · T1EDTA pH 8. 0、L 4mol · L-1NaCl、3% CTAB、2% PVP、4% β -巰基乙醇），充分混 勻后65°C水浴lh，每隔10-15min搖勻一次；
[0051] ②取出離心管，室溫下冷卻，加入0.6mL苯酚：氯仿：異戊醇（體積比25:24:1)， 充分混勻后靜置片刻，設定的離心參數(shù)為12000 Xg的條件下離心10min ;
[0052] ③取上清液至新離心管，加入0. 6mL的氯仿：異戊醇（體積比24:1)，混勻后設定 的離心參數(shù)為12000 Xg的條件下離心10min ;
[0053] ④取上清液至新離心管，加入0.1 mL的乙酸鈉和0. lmL-20°C預冷的異丙醇，充分 混勻后-20°C放置Ih以上，設定的離心參數(shù)為12000Xg的條件下離心8min ;
[0054] ⑤棄上清液，取沉淀用75%的乙醇洗滌2次，室溫揮發(fā)乙醇，用TE buffer或無菌 水溶解DNA，再用適量的RNase A消化（37°C水浴l_2h)，取出后于-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0055] (3) CTAB 改良法 1
[0056] 操作步驟同CTAB常規(guī)法，區(qū)別在于步驟①抽提時CTAB提取緩沖液中NaCl濃度提 高至2. 50mol · I71，同時加入30 μ L蛋白酶K(濃度20mg · ml/1)。
[0057] (4) CTAB 改良法 2
[0058] 操作步驟基本同CTAB常規(guī)法，區(qū)別在于上述步驟③中加入少量無水乙醇，可以沉 淀多糖，并且利于去除蛋白質。
[0059] 上述步驟③具體改動如下：待利用CTAB提取緩沖液抽提、離心后，取上清液至新 離心管，加入0. 3mL無水乙醇和0. 4mL苯酷：氯仿：異戊醇（體積比25:24:1)，充分混勾后 靜置片刻，離心取上清液；后續(xù)操作同上述CTAB常規(guī)法步驟④和⑤。
[0060] (5) CTAB 改良法 3
[0061] ①加入CTAB提取緩沖液于65°C水浴Ih后，加入0. 5mL氯仿：異戊醇（體積比 24:1)抽提去除蛋白質，設定的離心參數(shù)為13500 Xg的條件下離心10min，取上清液；
[0062] ②加入0. 6mL_20°C預冷的異丙醇用于沉淀核酸，充分混勻后設定的離心參數(shù)為 13500 Xg的條件下離心10min，棄上清液；
[0063] ③沉淀用0· 8mL Imol · L-1NaCl溶解DNA，加入0· 8mL苯酚：氯仿（體積比1:1)， 充分混勻后在設定的離心參數(shù)為13000 Xg的條件下離心10min，取上清液；
[0064] ④再加入0. 8mL氯仿：異戊醇（體積比24:1)，充分混勻后在設定的離心參數(shù)為 13000 Xg的條件下離心8min，取上清液；
[0065] ⑤加入0. 8mL預冷的無水乙醇混勻再次去除雜質，在設定的離心參數(shù)為13500 Xg 的條件下離心10min，棄上清液；
[0066] ⑥沉淀用70%的乙醇洗滌1次，室溫揮發(fā)乙醇，后續(xù)操作同上述CTAB常規(guī)法步驟 ⑤。
[0067] (6) SDS 法
[0068] 步驟如下：
[0069] ①加入 ImL 提取緩沖液（IOOmmol .T1Tris-HCl pH 8. 0、50mmol .L-1EDTA pH 8. 0、 0· 5mol · L-1NaCld^ β巰基乙醇），混勻后加入0· 5mL 10% SDS，充分混勻后65°C水浴 60min，期間每隔10_15min搖勾一次；
[0070] ②加入ImL 5mol · Γ1乙酸鈉，混勻后冰浴30min，在設定的離心參數(shù)為12000Xg 的條件下離心10min ;后續(xù)操作同上述CTAB常規(guī)法步驟③、④和⑤。
[0071 ] (7) SDS結合蛋白酶裂解法
[0072] 步驟如下：加入ImL 50 °C預熱的提取緩沖液（IOmmol · T1Tris-HCl pH 8. 0、 IOOmmol · T1EDTA pH 8. 0、0· 5% SDS、75mg · Γ1 蛋白酶 K)，充分混勻后 50°C水浴 2h，每隔 10-15min搖勻一次；后續(xù)操作同上述CTAB常規(guī)法步驟②、③、④和⑤。
[0073] (8)改良尿素法
[0074] 步驟如下：
[0075] ①加入 ImL 提取緩沖液（7mol · I71 尿素、0· 3mol · L-1NaCl、0. 034mol · I71 十二燒 基肌氨酸鈉、50mmol .L-1Tris-HCl pH 8.0、20mmol .L-1EDTA pH 8·0、2% β 疏基乙醇），充 分混勻后65°C水浴45min，期間每隔10-15min搖勻一次；②在設定的離心參數(shù)為13000Xg 的條件下離心l〇min，取上清加入100 μ L IOmol · I71乙酸胺，混勾后再加入2倍體積的無 水乙醇，混勻后在設定的離心參數(shù)為13000Xg的條件下離心10min ;
[0076] 后續(xù)操作同上述CTAB常規(guī)法步驟②、③、④和⑤。
[0077] 香蕉基因組DNA的質量檢驗
[0078] (1)①由上述各種方法提取的香蕉基因組DNA的凝膠電泳檢測
[0079] 取按上述各種方法提取的香蕉基因組DNA樣品3 μ L于1. 0%瓊脂糖凝膠（含EB - 溴化乙錠）中分別進行電泳，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察、拍照。
[0080] 在圖1(圖1-1、圖1-2、圖1-3以及圖1-4)中，1 :以香蕉果肉的基因組DNA為樣品 的泳道；2 :以香蕉果皮的基因組DNA為樣品的泳道；3 :以香蕉根的基因組DNA為樣品的泳 道；4 :以香蕉假莖的基因組DNA為樣品的泳道；5 :以香蕉葉的基因組DNA為樣品的泳道；M : Maker (10000) ;A: CTAB 常規(guī)法；B: CTAB 改良法 I ;C: CTAB 改良法 3 ;D: CTAB 改良法 2 ;E: SDS 法；F:SDS結合蛋白酶裂解法；G:改良尿素法；Η:氯化芐法。如圖1中所示，A(CTAB常規(guī) 法）與B(CTAB改良法1)下凝膠電泳圖類似，香蕉果肉與果皮樣品中未出現(xiàn)基因組DNA的 條帶，根中條帶不清晰，僅假莖與葉中出現(xiàn)較清晰的條帶；C(CTAB改良法3)與D (CTAB改良 法2)下凝膠電泳圖類似，香蕉果皮樣品中未出現(xiàn)基因組DNA的條帶，香蕉其它組織中出現(xiàn) 較清晰的基因組DNA的條帶；E(SDS法）與F(SDS結合蛋白酶裂解法）下凝膠電泳圖類似， 香蕉果肉與果皮樣品中未出現(xiàn)基因組DNA的條帶，而且香蕉其它組織中出現(xiàn)基因組DNA的 條帶不清晰；G(改良尿素法）與H(氯化芐法）下凝膠電泳圖類似，H(氯化芐法）提取的香 蕉的果肉、果皮、根、假莖以及葉中均有清晰的主條帶，而且條帶整齊明亮，幾乎沒有降解， 但是G(改良尿素法）下，香蕉果皮樣品中未出現(xiàn)基因組DNA的條帶。如上所述，僅H(氯化 芐法）能提取香蕉各組織中的基因組DNA，而且主條帶清晰明亮可見，即，該方法提取的DNA 完整性較好、質量較高。
[0081] ②按加入不同濃度氯化芐的氯化芐法提取的香蕉基因組DNA的凝膠電泳檢測
[0082] 取按不同體積氯化芐的氯化芐法提取的香蕉基因組DNA樣品3 μ L于1. 0%瓊脂糖 凝膠（含EB-溴化乙錠）中分別進行電泳，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察、拍照。
[0083] 在圖2中，1 :以香蕉果肉的基因組DNA為樣品的泳道；2 :以香蕉果皮的基因組DNA 為樣品的泳道；3 :以香蕉根的基因組DNA為樣品的泳道；4 :以香蕉假莖的基因組DNA為樣 品的泳道；5 :以香蕉葉的基因組DNA為樣品的泳道；M :Maker(10000) ;C1 :400 μ L氯化芐的 氯化芐法；C2 :200 μ L氯化芐的氯化芐法；C3 :60